分子生物学
FastDigest 限制性内切酶——Thermo Scientific
- 品牌： Thermo
- 产品货号： FD系列产品
- 规格：
- 货期：
FastDigest 限制性内切酶——Thermo Scientific
所有176种酶均使用一种统一缓冲液。酶切就是如此简单。
Thermo Scientific FastDigest 限制性内切酶是一套用于快速酶切的高级内切酶，具有如下优势：
在5-15分钟内完成酶切
缓冲液与下游应用100%兼容
酶切后可直接上样进行凝胶电泳
FastDigest 产品系列是目前业内最丰富的限制性内切酶产品系列之一。在酶学领域数十年的专业积累、丰富的同裂酶选择、由我们顶级生产设施提供的高纯度酶生产能力，共同助力打造出首款使用统一缓冲液体系的限制性内切酶系统。
FastDigest 限制性内切酶的优势
| FastDigest 限制性内切酶 | 传统限制性内切酶 | |
|---|---|---|
| 缓冲液体系 | 一种统一缓冲液 | 多达20种缓冲液 |
| 双重/多重限制性酶切 | 无拘无束——所有176种酶均使用一种统一缓冲液，且在其中均具有100%活性 | 受缓冲液兼容性限制 |
| 反应时间 | 5-15分钟 | 1小时至过夜 |
| 酶切后可直接上样进行凝胶电泳 | 是 | 否 |
| 下游实验应用 | 100%兼容缓冲液 | 部分兼容 |
| 星号活性 | 否 | 是 |
| 活性定义 | 在 FastDigest 缓冲液中，1 μL FastDigest 酶可在5至15分钟内切割 1 μg 底物 DNA | 在酶的最佳缓冲液中，1单位酶可在60分钟内水解 1 μg λDNA |
缓冲液具有100%活性
FastDigest绿色缓冲液和Thermo Scientific FastDigest缓冲液是我们专利的酶切缓冲液，对所有FastDigest限制性内切酶都具有100%活性。该缓冲体系可利用任意限制酶组合实现双重和多重酶切。无需连续酶切或更换缓冲液。
5分钟内在FastDigest绿色缓冲液中完成单重、双重和三重酶切
5分钟质粒DNA酶切比较：
泳道 M：Thermo Scientific GeneRuler Express 分子量标准（货
泳道1：对照，未酶切的质粒 DNA
泳道2：FastDigest EcoRI
泳道3：FastDigest EcoRI和FastDigest KpnI
泳道4：FastDigest EcoRI、FastDigest KpnI和FastDigest SmaI
缓冲液与下游实验应用100%兼容
DNA/RNA修饰酶，如连接酶、磷酸酶、激酶和嗜温DNA聚合酶在FastDigest和FastDigest绿色缓冲液中具有100％活性。因此，在下游应用中使用的酶可以直接加到FastDigest反应混合物中。不需要缓冲液更换或纯化步骤。
| DNA/RNA 修饰酶 | 在FastDigest绿色缓冲液/FastDigest缓冲液中的活性 |
|---|---|
| DNA 聚合酶 I，大肠杆菌 | 100% |
| Klenow 片段 | 100% |
| Klenow 片段 (exo-) | 100% |
| T4 DNA 聚合酶 | 100% |
| T7 DNA 聚合酶 | 100% |
| T4 DNA 连接酶* | 75–100% |
| FastAP 热敏碱性磷酸酶 | 100% |
| T4 多聚核苷酸激酶 | 100% |
* T4 DNA连接酶活性需要0.5 mM ATP。
在5-15分钟内完成酶切
使用一种统一缓冲液在5-15分钟内完成双重和多重酶切：
节省时间和精力，提高酶切通量
所有种类的DNA模板都提供相应的酶切时间（质粒DNA、PCR产物、基因组DNA）。
所有模板都不需要酶切过夜。
反应时间短，无星号活性。
| 常规限制性内切酶 连续酶切 | FastDigest 限制性内切酶 一种反应混合物 | ||
|---|---|---|---|
| Apal的反应体系构建 | 约2分钟 | FastDigest ApaI和XhoI的反应体系构建 | 约2分钟 |
| 孵育 | 60分钟 | 孵育 | 5分钟 |
| Xhol的反应体系构建 | 约2分钟 | — | — |
| 孵育 | 60分钟 | — | — |
| 总时间 | >2小时 | 总时间 | 7分钟 |
基于方便性考虑，我们开发了FastDigest绿色缓冲液，其与FastDigest无色缓冲液具有同样的性能，但可将酶切反应混合物直接上样进行凝胶电泳。10X FastDigest绿色缓冲液包含密度试剂和两种示踪染料，从而可以实现直接上样电泳。蓝色染料在1%琼脂糖凝胶中的迁移率与3-5 kb DNA片段接近，并在424 nm时出现激发峰；而黄色染料在1%琼脂糖凝胶中的迁移速度稍快于10 bp DNA片段，并在615nm时出现激发峰。
FastDigest 绿色缓冲液
含有FastDigest Green绿色缓冲液的反应混合物：
泳道1：电泳前，上样至凝胶孔
泳道2：电泳后分离
反应时间短，无星号活性
FastDigest酶与FastDigest（绿色）缓冲液结合使用，以消除星号活性：
反应时间短（5-15分钟），无需长时间消化
统一缓冲液，具有适用于所有酶的最佳pH和盐浓度
优化的酶和甘油浓度
使用常规限制性内切酶，在较长的反应时间、高酶浓度和高甘油浓度、高 pH 值或低离子强度情况下，可能表现出星号或“松弛”活性。FastDigest 酶很好的解决了所有这些问题，可在5分钟内实现单重、双重甚至三重酶切，无任何星号活性出现。
5分钟内完成质粒DNA的单重和双重酶切，无星号活性迹象
5分钟质粒DNA酶切比较：
泳道1：FastDigest SmaI
泳道2：FastDigest EcoRI
泳道3：FastDigest SmaI 和 FastDigest EcoRI 双酶切
泳道 M：GeneRuler 1 kb Plus DNA 分子量标准（货
泳道 C：对照，未酶切的质粒 DNA
参考文献
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