1、洗涤液体积不足或底物被残留于孔底的结合物所污染：洗涤时，缓冲液充满至孔边缘，但要确保不能溢出孔外。
2、结合物浓度过高：检查是否按照说明书推荐比例稀释。
3、血清中有血清因子：勿加热血清。
4、底物容器不洁净：用酸清洗容器瓶，用蒸馏水冲洗。
5、底物孵育时，微孔板曝光：加底物时，立即将板置于暗处。

1、显色时间不足：适当延长显色时间。
2、孵育温度偏低：36度为最适反应温度（欣博盛ELISA试剂盒）。
3、未加终止液：加入终止液，增强颜色反应的强度，稳定最终的颜色反应。

1、样本未置于室温：实验开始前，将样本平衡至室温。
2、酶结合物活性减弱：检测稀释度。
3、酶活性收到抑制如叠氮钠：避免实验不当的防腐剂。
4、显色温度不适当：按说明书操作。